產(chǎn)品名 | TY培養(yǎng)基 |
別名 | |
英文名 | |
CAS號 | |
分子式 | |
分子量 | |
EINECS編號 | |
MDL號 |
操作步驟(僅供參考):
1、配制 TY 培養(yǎng)基:
①稱取本品8g于990mL蒸餾水或去離子水中,加熱溶解,121℃高壓滅菌15分鐘,冷卻至55度后,加入10ml 高壓滅菌的1mol/L氯化鈣溶液,混勻后,傾注培養(yǎng)皿分裝。
②如果需要 TY 瓊脂培養(yǎng)基 ,可在第①步溶解 TY 培養(yǎng)基(粉劑)后加入 15g 瓊脂粉 ,加熱 溶解后再高壓滅菌處理。
2、發(fā)根農(nóng)桿菌甘油菌培養(yǎng):
①取出甘油菌置于冰上 ,并置于超凈臺內(nèi) ,后續(xù)操作都在超凈臺內(nèi)操作。
②把鑷子的頂端在 70%酒精中蘸一下 ,并且在酒精燈上略略燒一下 ,使鑷子的頂端處于 無菌狀態(tài)。
③用鑷子夾取一個無菌的塑料槍頭或牙簽,蘸取甘油菌,然后把蘸有菌液的塑料槍頭或牙 簽放到含有 50μg/ml 鏈霉素 的 TY 液體培養(yǎng)基的試管內(nèi)或細菌培養(yǎng)瓶內(nèi) ,28~30oC , 約 200rpm 培養(yǎng)至少 24h。
3、農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞的培養(yǎng):
①取-70°C 保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或冰水浴片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時 插入冰浴中。
②每 100μl 感受態(tài)加 1μg 質(zhì)粒DNA ,用手撥打管底混勻 ,依次于冰上靜置 5 分鐘、液氮5分鐘、 37°C 水浴 5 分鐘、冰浴5分鐘。
③加入 800μl TY 液體培養(yǎng)基 ,于 28°C 振蕩培養(yǎng) 2~3 小時。
④5000rpm 離心 1min 收菌 ,留取 100μl 左右上清 ,輕輕吹打重懸菌塊 ,涂布于含相應 抗生素的 TY 平板上 ,倒置放于 28°C 培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天。
1、配制 TY 培養(yǎng)基:
①稱取本品8g于990mL蒸餾水或去離子水中,加熱溶解,121℃高壓滅菌15分鐘,冷卻至55度后,加入10ml 高壓滅菌的1mol/L氯化鈣溶液,混勻后,傾注培養(yǎng)皿分裝。
②如果需要 TY 瓊脂培養(yǎng)基 ,可在第①步溶解 TY 培養(yǎng)基(粉劑)后加入 15g 瓊脂粉 ,加熱 溶解后再高壓滅菌處理。
2、發(fā)根農(nóng)桿菌甘油菌培養(yǎng):
①取出甘油菌置于冰上 ,并置于超凈臺內(nèi) ,后續(xù)操作都在超凈臺內(nèi)操作。
②把鑷子的頂端在 70%酒精中蘸一下 ,并且在酒精燈上略略燒一下 ,使鑷子的頂端處于 無菌狀態(tài)。
③用鑷子夾取一個無菌的塑料槍頭或牙簽,蘸取甘油菌,然后把蘸有菌液的塑料槍頭或牙 簽放到含有 50μg/ml 鏈霉素 的 TY 液體培養(yǎng)基的試管內(nèi)或細菌培養(yǎng)瓶內(nèi) ,28~30oC , 約 200rpm 培養(yǎng)至少 24h。
3、農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞的培養(yǎng):
①取-70°C 保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或冰水浴片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時 插入冰浴中。
②每 100μl 感受態(tài)加 1μg 質(zhì)粒DNA ,用手撥打管底混勻 ,依次于冰上靜置 5 分鐘、液氮5分鐘、 37°C 水浴 5 分鐘、冰浴5分鐘。
③加入 800μl TY 液體培養(yǎng)基 ,于 28°C 振蕩培養(yǎng) 2~3 小時。
④5000rpm 離心 1min 收菌 ,留取 100μl 左右上清 ,輕輕吹打重懸菌塊 ,涂布于含相應 抗生素的 TY 平板上 ,倒置放于 28°C 培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天。
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